Откройте для себя обращенно-фазовую ЖХ-МС для характеристики моноклональных антител

Моноклональные антитела в процессе производства, приготовления лекарственных форм и хранения подвержены химической модификации и деградации. Поэтому в течение производственного процесса важно следить за чистотой и молекулярной массой моноклональных антител. 

Характеристика моноклональных антител с помощью обращенно-фазовой ЖХ-МС

Обращенно-фазовая ЖХ-МС представляет собой аналитический метод, хорошо зарекомендовавший себя для анализа моноклональных антител, интактных или фрагментированных, позволяющий получить точные значения молекулярных масс. Правильный выбор обращенно-фазовой колонки и методики ЖХ чрезвычайно важен для сокращения времени анализа и обеспечения воспроизводимого разделения с высоким разрешением.

Решения для рабочего процесса обращенно-фазовой хроматографии и основанных на ней задач характеристики включают:

  • пробоподготовка: Проба может анализироваться в интактном виде или подвергаться восстановлению и алкилированию.
  • разделение (обращенно-фазовый режим): Варианты с различными размерами пор колонок для обращенно-фазовой хроматографии с полимерным сорбентом (PLRP-S) обеспечивают высокую эффективность разделения во всем диапазоне белков и пептидов.
  • детектирование и анализ данных: Полный анализ получаемых данных.

PLRP-S: Гибкость выбора

Целью характеристики антител с помощью обращенно-фазовой ЖХ-МС является получение сведений об изменении первичной структуры моноклональных антител. Помимо необходимости настройки новой методики для новой белковой молекулы, существует множество других трудностей, требующих решения:

  • Недостаточное разрешение может привести к снижению точности и воспроизводимости, что пагубным образом отражается на надежности результатов.
  • Продолжительное время анализа приводит к снижению пробопотока.
  • Небольшой срок службы колонок означает, что исследователи вынуждены чаще приобретать новые колонки, что представляет собой неэффективное использование ресурсов.
  • Перенос методик на систему с несколькими колонками требует использования различных колонок для УФ-детектора и масс-спектрального детектора, что увеличивает затраты времени.

В целях решения этих проблем колонки PLRP-S заполнены долговечными устойчивыми полимерными частицами, позволяющими получить воспроизводимые результаты и продлить срок службы колонок. Такие характеристики дают возможность реже менять колонки, за счет чего снижаются затраты на анализ и повышается надежность полученных результатов. Термическая и химическая стабильность колонок PLRP-S при выполнении разделения при крайних значениях диапазона pH и высоких температурах обеспечивает универсальность при анализе сложных проб.

Кроме того, применение многоцелевой колонки позволяет снизить затраты. Также имеется возможность выбора для широкого диапазона типов проб, поскольку колонки PLRP-S поставляются в вариантах с размерами пор сорбента в диапазоне 100–4000 Å. Такой диапазон размеров пор позволяет обеспечить высокую эффективность разделения для всего диапазона белков и пептидов. Превосходные формы пиков при использовании различных ион-парных реагентов свидетельствуют о том, что одни и те же колонки и подвижные фазы можно использовать с УФ-детекторами и масс-спектральными детекторами без повторной разработки методики для различных детекторов.

Колонка PLRP-S демонстрирует превосходную универсальность в задачах характеристики моноклональных антител. Методики обращенно-фазовой ЖХ-МС, использующие данную колонку, применимы как для интактных моноклональных антител, так и для их фрагментов. Колонки Agilent PLRP-S с полимерным сорбентом заполнены твердыми, макропористыми, сферическими частицами полистирол-дивинилбензола. Эти частицы являются по своей природе гидрофобными, поэтому для разделения с помощью обращенно-фазовой ЖХ-МС не требуются привитая фаза или алкильные лиганды.

Пробоподготовка с помощью патронов AdvanceBio Desalting-RP

Патроны Agilent AdvanceBio Desalting-RP разрабатываются и производятся для удаления ионов солей непосредственно в потоке перед масс-спектральным детектированием при анализе биомолекул с помощью систем ВЭЖХ или УВЭЖХ. Патроны содержат обращенно-фазовые полимерные частицы размером 10 мкм с порами размером 1000 Å, эффективно удаляющие соли и повышающие качество получаемых масс-спектральных данных. Эти колонки патронного типа можно использовать с любой системой ЖХ для обессоливания собранных фракций. Они позволяют использовать масс-спектральное детектирование совместно с такими традиционно несочетаемыми с ним хроматографическими методами, как ионообменная, эксклюзионная и аффинная хроматография.

Патроны Agilent AdvanceBio Desalting-RP позволяют экономить время за счет обессоливания проб непосредственно в потоке. Они дают возможность уменьшить объем технического обслуживания оборудования и снизить время его простоя за счет предотвращения загрязнения масс-спектрометра солями.

Чтобы узнать подробнее о том, как Agilent помогает повысить надежность анализа с использованием обращенно-фазовой ЖХ-МС, перейдите по ссылке.

Поделиться